Keywords：溶酶體，純化溶酶體組分，Tritosomes，SD大鼠肝tritosomes，Lysosomes，Tyloxapol（Triton WR 1339）臨床前藥物研發(fā)，ADC藥物，小核酸藥物，siRNA，ASO，Preclinical Drug Development;

隨著生物技術(shù)的快速發(fā)展，溶酶體（Lysosomes）在藥物研發(fā)中的重要作用日益凸顯，尤其是小核苷酸藥物及ADC藥物，溶酶體是該類藥物開發(fā)過程中必-不可-少的體外研究模型。因此，開發(fā)分離溶酶體的技術(shù)勢在必得。然而，溶酶體具有與線粒體非常相似的密度，傳統(tǒng)密度梯度離心法難以有效分離。Tyloxapol（Triton WR 1339）藥物的應(yīng)用通過選擇性降低溶酶體密度解決了這一難題，通過該種方法分離得到的溶酶體稱為Tritosomes。Tritosomes是一種特殊的純化和富集溶酶體組分，為溶酶體相關(guān)研究提供了更精準的實驗手段，尤其在藥物研發(fā)領(lǐng)域具有廣泛應(yīng)用價值。鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，成功研發(fā)SD大鼠肝Tritosomes，為客戶開展藥物研發(fā)等試驗提供更多選擇。

01    Tritosomes介紹

Tritosomes是一種通過負載非離子型表面活性劑Tyloxapol（Triton WR-1339）制備的特殊溶酶體。通過向?qū)嶒瀯游铮ㄈ绱笫螅┳⑸銽yloxapol（Triton WR-1339），該物質(zhì)會被肝細胞內(nèi)吞并聚集在溶酶體中。通過疏水作用嵌入溶酶體膜，與膜磷脂形成復(fù)合物，導(dǎo)致溶酶體脂質(zhì)組成改變。例如，處理后的溶酶體甘油三酯和膽固醇含量顯著增加，而膜脂流動性提高。這種脂質(zhì)重構(gòu)直接降低了溶酶體的整體密度，使其從常規(guī)的1.18-1.21 g/mL降至1.08-1.13 g/mL，與線粒體（1.18-1.20 g/mL）的密度差異擴大至可區(qū)分范圍。此外，Tyloxapol（Triton WR-1339）可能干擾溶酶體與其他細胞器（如吞噬體）的融合過程。例如，在吞噬實驗中，結(jié)合Triton的溶酶體無法與含牛血清白蛋白的吞噬體融合，導(dǎo)致兩者在密度梯度中分離。這種 “隔離效應(yīng)" 進一步確保溶酶體在密度梯度離心時形成獨立條帶。因此，結(jié)合了Tyloxapol的溶酶體被人們稱為Tritosomes，之后漸漸演變?yōu)榱搜芯考兓透患苊阁w時的常用技術(shù)。

Tritosomes保留了溶酶體的酸性水解酶活性（如組織蛋白酶、酸性磷酸酶），并且與傳統(tǒng)溶酶體分離方法相比，該純化體系得到的Tritosomes具有更高的純度（可去除90%以上的線粒體污染）和均一性，為研究人員提供了精準的亞細胞系統(tǒng)，可排除其他細胞器的干擾，專門聚焦于影響藥物行為的溶酶體相關(guān)過程。

02    Tritosomes在臨床前藥物研發(fā)中的應(yīng)用

Tritosomes的核心應(yīng)用價值在于為科研人員深入解析藥物與溶酶體的相互作用機制提供關(guān)鍵支持。臨床前研究中，研究人員借助該制劑探究實驗性化合物在溶酶體內(nèi)的截留程度，這一過程會直接影響藥物的組織分布特征與長期蓄積水平，是評估藥物體內(nèi)行為的重要環(huán)節(jié)。此外，明確藥物被溶酶體攝取的具體機制，對于預(yù)測藥物相關(guān)不良反應(yīng)（如藥物誘導(dǎo)的磷脂沉積癥）同樣至關(guān)重要：此類不良反應(yīng)不僅會削弱藥物的臨床安全性，還可能導(dǎo)致其無法通過監(jiān)管機構(gòu)的上市審批，直接影響藥物研發(fā)進程。

【Tritosomes與抗體偶聯(lián)藥物（ADC）研發(fā)】

抗體偶聯(lián)藥物（Antibody-Drug Conjugate，ADC）是通過連接子（Linker）將小分子細胞毒素（Paylaod）偶聯(lián)至靶向性抗體或抗體片段上的一類新型的生物技術(shù)藥物（圖1），可以增強藥物靶向性和穩(wěn)定性、減少臨床毒副反應(yīng)、提高治療指數(shù)，兼具傳統(tǒng)小分子藥物的殺傷效應(yīng)和抗體藥物的靶向性，主要應(yīng)用于抗腫瘤或者其他疾病的靶向治療。

圖1 ADC藥物的結(jié)構(gòu)和功能示意圖

來源：Antibody drug conjugate: the“biological missile" for targeted cancer therapy

在ADC藥物的研發(fā)過程中，Tritosomes作為替代研究模型，在探究細胞毒性藥物胞內(nèi)釋放機制中發(fā)揮關(guān)鍵作用。由于ADC需依賴溶酶體蛋白酶與水解酶完成兩大核心過程：切割連接子（linker）或降解抗體骨架，因此經(jīng)純化并富含溶酶體酶的Tritosomes可提供一個可靠且高效的體外研究平臺，為評估上述過程的效率及作用機制提供支持。

通過模擬體內(nèi)溶酶體降解微環(huán)境，Tritosomes能夠幫助研究人員厘清三項核心信息：不同連接子化學(xué)結(jié)構(gòu)的切割效率高低、載荷的釋放模式，以及物種特異性差異對藥物釋放過程的潛在影響。這一特性使tritosomes成為ADC研發(fā)中重要的模型：在推進至體內(nèi)實驗前，借助該模型評估ADC的穩(wěn)定性及代謝特性，不僅可顯著降低實驗成本，還能為臨床前實驗動物的篩選提供科學(xué)依據(jù)。

【Tritosomes與小核酸藥物研發(fā)】

小核酸藥物，又稱寡核苷酸藥物（Oligonucleotides, ONs），憑借其獨特的技術(shù)特點成為近年來新藥研發(fā)領(lǐng)域關(guān)注的焦點，是目前發(fā)展最-為迅猛的基因療法之一。小核酸藥物包括小干擾RNA（small interfering RNA, siRNA）、反義寡核苷酸（Antisense oligonucleotide，ASO）、微小RNA（microRNA, miRNA）、小激活RNA（small activating RNA, saRNA）、信使RNA（messenger RNA, mRNA）、核酸適配體（Aptamer）和抗體核酸偶聯(lián)藥物（Antibody-oligonucleotide conjugates, AOC）等。當前研究的重點主要集中于siRNA、ASO和Aptamer這三種小核酸藥物上。小核酸藥物研究的核心挑戰(zhàn)在于：多數(shù)寡核苷酸會被內(nèi)體與溶酶體捕獲截留，一旦無法從這類細胞器中逃逸進入細胞質(zhì)，便會在其中快速降解，導(dǎo)致治療活性喪失。

在小核酸藥物研究領(lǐng)域，tritosomes的價值同樣突出。Tritosomes能夠提供一個可控的體外研究體系，專門用于探究未修飾及化學(xué)修飾小核酸藥物的降解動力學(xué)規(guī)律。通過在該體系中對小核酸藥物開展測試，研究人員不僅能評估各類化學(xué)修飾抵御溶酶體核酸酶降解的能力強弱，還能驗證旨在促進內(nèi)體逃逸的遞送系統(tǒng)的實際效用。因此，tritosomes可作為 “生化應(yīng)激測試" 工具，在推進至復(fù)雜動物模型實驗階段前，為小核酸藥物的穩(wěn)定性優(yōu)化及遞送策略改進提供關(guān)鍵支持。

03    IPHASE相關(guān)產(chǎn)品

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綜上所述，采用Tyloxapol（Triton WR-1339）制備的tritosomes是一種純化和富集溶酶體組分，其研究是現(xiàn)代臨床前藥物研發(fā)體系中核心組成部分。借助肝tritosomes，科研人員能夠更精準地開展三項關(guān)鍵研究工作：探究藥物的胞內(nèi)分布特征、評估藥物在溶酶體內(nèi)的穩(wěn)定性，以及分析藥物潛在的安全性風險。而隨著制藥行業(yè)愈發(fā)清晰地認識到溶酶體通路對藥物療效與毒性的雙重重要性：二者直接決定藥物研發(fā)成敗，肝tritosomes也愈發(fā)彰顯其不可替代的工具屬性：其可有效銜接實驗研究與療法的成功研發(fā)，成為推動藥物從實驗室研究邁向臨床應(yīng)用的關(guān)鍵橋梁。鑒于此，IPHASE作為體外研究生物試劑引-領(lǐng)者，憑借先-進的設(shè)備、專業(yè)的技術(shù)人員和多年研發(fā)經(jīng)驗，成功研發(fā)SD大鼠肝Tritosomes和ICR/CD-1小鼠肝Tritosomes，為客戶開展藥物研發(fā)等試驗提供更多選擇。